乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM的构建及黄酮类化合物逆转耐药性的研究

【摘要】乳腺癌是女性多发的恶性肿瘤之一，对女性的身心健康造成严重威胁。在乳腺癌的化疗过程中很容易产生肿瘤多药耐药性（Multidrugresistance，MDR）MDR是化疗成功的主要障碍，对肿瘤的治疗极为不利。深入研究肿瘤细胞的耐药机制，寻找关键的靶点，针对靶点设计逆转肿瘤细胞多药耐药性的药物，为乳腺癌患者的治疗带来希望。近年来，国内外学者致力于对肿瘤多药耐药逆转剂的开发研究，大量研究证实许多黄酮类化合物对多种肿瘤细胞有一定抗肿瘤活性，能够抑制肿瘤细胞的增殖、影响其细胞周期的分布或诱导肿瘤细胞的凋亡，却对正常细胞低毒或无毒，黄酮类化合物在逆转肿瘤耐药性方面的研究引起高度关注。因此，本论文选择10种结构不同黄酮类化合物与阿霉素联合作用MCF-7细胞，研究黄酮类化合物对阿霉素的增敏作用，在该基础上构建乳腺癌阿霉素耐药细胞系MCF-7/adm，用上述黄酮类化合物逆转该耐药细胞系的耐药性。主要研究内容与结果如下：1.通过MTT法检测10种黄酮类化合物与阿霉素联合作用，对阿霉素抑制MCF-7增殖的影响，而且通过hochest33342染色观察黄酮类化合物与阿霉素联合作用MCF-7细胞较阿霉素单独作用时的细胞凋亡情况，并且通过流式细胞术对细胞凋亡的影响进行定量分析。结果表明：3,5,7,4-4OH黄酮、5,7-2OH黄酮、5-OH-3-OCH3黄酮、7-OH-3-OCH3黄酮、6-OH-3-OCH3黄酮、5,7,4-3OH黄酮、7-OH-2-OCH3黄酮都促进阿霉素对MCF-7增殖的抑制作用，而5，7,3,4-4OH黄酮，Neodiosmin，Rutin则没有该效果。Hochest染色以及流式细胞术结果与MTT结果一致，5，7,3,4-4OH黄酮，Rutin，Neodiosmin与阿霉素联合作用较阿霉素单独作用凋亡率低，另外7种黄酮类化合物与阿霉素联合作用比阿霉素单独作用凋亡率高。2.采用大剂量间歇诱导法诱导MCF-7细胞，建立阿霉素耐药的人乳腺癌细胞系MCF-7/Adm，并通过MTT法检测耐药模型较野生株的耐药倍数，流式细胞术检测细胞内药物的积累量，以及real-timePCR检测多药耐药的标志基因ABCB1、ABCC1、ABCG2的表达变化。结果显示：阿霉素耐药的乳腺癌细胞系MCF-7/Adm诱导成功，阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/Adm细胞存活的IC50值分别为0.535μg/mL和173.275μg/mL，耐药倍数为324。流式细胞术检测MCF-7细胞中的阿霉素积累量明显高于MCF-7/Adm；MCF-7/Adm细胞中mRNA水平ABCB1基因表达明显上调，ABCG2和ABCC1基因表达下调。3.通过MTT法检测10种黄酮类化合物对MCF-7/Adm细胞耐药性的逆转效果，结果显示3,5,7,4-4OH黄酮、5,7-2OH黄酮、7-OH-3-OCH3黄酮、6-OH-3-OCH3黄酮、5-OH-3-OCH3黄酮、7-OH-2-OCH3黄酮作用后，阿霉素对MCF-7/adm的IC50值都小于阿霉素单独作用的值，说明这6种黄酮化合物对MCF-7/adm耐药性都有一定的逆转作用。但由于所选黄酮类化合物的结构不同，他们的逆转作用的有所不同。
【作者】郑婷婷；
【导师】许传莲；
【作者基本信息】浙江理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】黄酮类化合物；MCF-7/ADM；乳腺癌细胞；耐药细胞株；细胞凋亡基因；逆转剂；逆转作用；耐药细胞系；基因表达；浓度作用；

【参考文献】
[1]范丽.复方TRAIL/DOX脂质体用于脑胶质瘤的治疗研究[D].复旦大学,药剂学,2012,硕士.
[2]王进喜.铁路客运决策支持系统理论研究[D].西南交通大学,2004.
[3]宋蔼瑕.江西省农村居民贫困问题研究[D].江西财经大学,理论经济学,2013,硕士.
[4]廖胜石.2003年7月5日江淮流域梅雨锋暴雨的机制分析及数值模拟[D].南京气象学院,气象学,2004,硕士.
[5]穆永杰.臭氧深度处理垃圾焚烧渗沥液及控制MBR污染的研究[D].北京林业大学,环境科学,2013,硕士.
[6]杨扬.口译中的副语言符号信息的研究[D].广东外语外贸大学,法语口译（专业学位）,2012,硕士.
[7]张家榕.基于云服务的移动终端订餐系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[8]俞洋.山东工业职业学院就业服务系统的设计与实现[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[9]王珺.轴向哌啶类取代萘酞菁配合物的合成及其光动力效应研究[D].黑龙江大学,分析化学,2013,硕士.
[10]韩书琳.刘壎与《隐居通议》的文学研究[D].复旦大学,古代文学,2012,硕士.
[11]刁玉婷.自我评价对高中生英语写作水平的有效性研究[D].东北师范大学,学科教学,2012,硕士.
[12]岳雪涛.多形态羟基磷灰石粉体、涂层的制备及表征[D].山东大学,材料学,2014,博士.
[13]吴全.基于多源数据复合分析的作物遥感识别方法研究[D].中国农业大学,农业机械化工程,2004,硕士.
[14]文汲.施氮及凋落物输入对亚热带樟树人工林土壤氮矿化的影响[D].中南林业科技大学,生态学,2014,硕士.
[15]蔚翠,李佳,刘庆彬,蔡树军,冯志红.Si面4H-SiC衬底上外延石墨烯近平衡态制备[J].物理学报,2014,03:415-420.
[16]杜娟.独立分量分析及其在图像去噪中的应用研究[D].南京邮电大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[17]陈全胜,李凌浩,韩兴国,阎志丹,王艳芬,张焱,袁志友,唐芳.温带草原11个植物群落夏秋土壤呼吸对气温变化的响应[J].植物生态学报,2003,04:441-447.
[18]郎罡.ZJ银行信息安全风险管理策略研究[D].大连理工大学,MBA（专业学位）,2012,硕士.
[19]杨振兴.侵彻加速度信号实时仿真系统的设计[D].中北大学,机械电子工程,2014,硕士.
[20]刘冠妮.日常生活体验对营造场所精神的启示[D].云南艺术学院,设计艺术学,2013,硕士.
[21]魏藏锋.翻译中的文化失衡[D].陕西师范大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[22]王丽国.高三生物总复习的教学策略与设计[D].山东师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[23]刘洋安.新疆低碳经济发展研究[D].新疆大学,人口、资源与环境经济学,2013,硕士.
[24]李茜.模糊语言在英语外交语言中的语用研究[D].安徽大学,英语语言文学,2013,硕士.
[25]李瑞峰.2010西安曲江—澳大利亚电影周采访交替传译实践报告[D].西安外国语大学,翻译,2013,硕士.
[26]徐斌.级联AWGs色散补偿系统的传输理论分析[D].福建师范大学,光学,2004,硕士.
[27]王小晔.心理测评在上海警察招募与甄选中应用的研究[D].华东师范大学,应用心理学,2004,硕士.
[28]李林杰.基于特征子空间的步态识别研究[D].燕山大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[29]陈伟伟.轻型节能RCS组合结构非线性地震反应分析及抗震设计方法研究[D].华侨大学,结构工程,2013,硕士.
[30]刘志坤.雪天获取图像清晰化处理研究[D].沈阳理工大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[31]刘康.利率市场化进程中我国中小型商业银行利率风险管理研究[D].重庆大学,产业经济学,2014,硕士.
[32]王松.吡柔比星联合维生素C对膀胱癌原代细胞增殖抑制作用的研究[D].桂林医学院,泌尿外科,2012,硕士.
[33]康曼.初级水平泰国留学生听力理解学习策略研究[D].西南大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[34]李娇.层次化SOC可测性架构及测试调度优化策略研究[D].上海大学,控制理论与控制工程,2014,博士.
[35]吴晓娟.地方民俗文化精英与传统节日的复兴和重构[D].山西师范大学,民俗学,2014,硕士.
[36]殷晓文.中职卫生专业数学问题情境的创设[D].山东师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[37]梓文.石墨烯基墨水[J].兵器材料科学与工程,2013,04:67.
[38]谭克虎,张宇.欧洲高铁货运业务发展模式研究[J].中国铁路,2014,01:17-22.
[39]孙运利,王昌辉,乐孜纯.基于微流控光学可调谐的渐变折射率特性研究[J].物理学报,2014,15:280-286.
[40]梁晓爽.Rap1GAP下调宫颈癌细胞—基质粘附机制的研究[D].大连医科大学,临床检验诊断学,2012,硕士.
[41]雷静.远程学习资源分类及学生自主利用学习资源的能力研究[D].首都师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[42]朱冰,刘中田,周果.基于电磁场模型的轨道电路钢轨阻抗研究[J].铁路计算机应用,2014,05:52-56+59.
[43]周海峰.油井射孔段管柱对爆炸冲击载荷动态响应研究[D].北京理工大学,兵器科学与技术,2014,硕士.
[44]项飞.外贸企业资源管理系统的设计与实现[D].华中科技大学,软件工程,2013,硕士.
[45]周业成.有机器件与改性石墨烯电学性质的理论研究[D].兰州大学,有机化学,2013,硕士.
[46]马萱春,方云飞.井下资料与地震时间剖面的综合显示[J].石油地球物理勘探,1980,S1:79.
[47]房静荃.《挪威的森林》汉译本译者的显形与隐形[D].吉林大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[48]李慧敏.新生代农民工融入城市问题及对策研究[D].山西财经大学,马克思主义中国化研究,2014,硕士.
[49]曾伟恒.针刺对宫内窘迫HIBD大鼠海马区活性氧（ROS）水平的影响[D].广州中医药大学,针灸推拿学,2013,硕士.
[50]吕继青.志愿者组织运行机制研究[D].山东大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.